НАУЧНИ ТРУДОВЕ НА РУСЕНСКИЯ УНИВЕРСИТЕТ , том 51, серия 9.2 Пребиотиците и влиянието им върху човешкото здраве Цветеслава Игнатова-Иванова, Радо

Препис

1 Пребиотиците и влиянието им върху човешкото здраве Цветеслава Игнатова-Иванова, Радослав Иванов, Илия Илиев, Искра Иванова Prebiotics potential and impact on human health : A prebiotic is a non-digestible food ingredient that beneficially affects the host by selectively stimulating the growth and/or the activity of one or a limited number of bacteria in the colon.prebiotics are like other carbohydrates that reach the cecum, such as nonstars polysaccharides, sugar alcohol, and resistant starch, in being substrates for fermentation. In the large intestine, prebiotics, in addition to their selective effects on bifidobacteria and lactobacilli, influence manu aspects of bowel function througth fermentation. Short-chain fatty acids are a major product of prebiotic breakdown, but as yet, no characteristics pattern of fermentation acids has been identified[13].. Key words: prebiotics, fermentation, fatty acids. ВЪВЕДЕНИЕ Пребиотиците са селективно ферментиращи се добавки, които позволяват специфична промяна и в двете състава и/или активността в стомашно-чревната микрофлора, като влияят положително на хората и човешкото здраве [18,37]. Според тази нова дефиниция се изравняват понятията «пребиотици» и «бифидогенен ефект». Пребиотиците или по-скоро бифидогенния ефект зависят от типа и концентрацията на бифидобактериите в дебелото черво на човека и това не е просто количествн резултат за съществуващо родство. За да могат хранителните компоненти да се класифицират като пребиотици е необходимо те да притежават следните характеристики, които да бъдат доказани чрез in vitro и in vivo тестове: 1. Да са несмилаеми да са резистентни на стомашните киселини, храносмилателните ензими и чревната абсорбция; 2. Да се ферментират от чревната микрофлора; 3. Да са способни към селективно стимулиране на растежа и активността на чревните бактерии [18,25,34,37]. Много важно за влиянието на пребиотиците върху селективното разпространение на полезната микробиална популация е тяхното въздействие върху метаболитната активност на микрофлората. Пребиотиците могат да стимулират автохтонните бактерии не само към активен растеж, но и към продуциране на компоненти, които влияят положително върху здравето (фиг.1) [24]. В резултат на ферментацията на въглехидратите в червата се продуцират късо верижни мастни киселини и млечна киселина, които са важен фактор, определящ ph на чревният лумен. Повече от около 300 mmol/ml от късо верижните мастни киселини се продуцират ежедневно и предоминират в лумена на червата [14]. Три са основните мастни киселини: ацетат (60%), пропионат (20%) и бутират (18%), които се залавят за колоноцитите и активно се метаболизират [23,31]. Мастните киселини имат силно влияние върху метаболизма на хората. Ацетатът и пропионатът намаляват продуцирането на холестерол [44]. Пребиотиците увеличават концентрацията на ацетата и лактата при ферментацията от млечнокиселите бактерии и бифидобактериите. Дългите вериги на несмилаеми въглехидрати позволяват да се стимулира метаболизма на бактериите в по-крайните дялове на храносмилателният тракт, тъй като се забавя ферментацията им, докато късите вериги се усвояват лесно. Бактериите в правото черво често са гладуващи и подлагат на протеолиза мъртвите клетки и последователно ферментират освободените амино киселини. В резултат на това се продуцират цитотоксични (гнилостни) метаболити

2 Фиг. 1. Предполагаем механизъм на пребиотичната активност за подобряване човешкото здраве по [11]. КВМК-късоверижни мастни киселини, Е-ензими

3 Балансът между ферментацията - формиране на късоверижни мастни киселини и гниенето - формирането на фенолни компоненти, като скатол, индол и крезол е много важен за изясняване на пребиотичното действие [7,41]. Способността на инулина да увеличава количеството на Bifidobacretium sp. и отчасти Lactobacillus е показано в различни изследвания [1,2,6,33]. Bifidobacterium lognum и B. bifidum много добре се развиват в присъствието на олигофруктоза [6,33], която представлява кратковерижни фрагменти инулин (от 2 до 8 молекули фруктоза). Тази олигофруктоза обаче се усвоява от бактериите в началото на дебелото черво за около 5 часа. За бифидобактериите, които населяват крайните отдели на дебелото черво тази олигофруктоза не достига, а всъщност възпалителните процеси и онкологичните проблеми възникват именно там. Това налага чрез съвременни биотехнологични методи да се произвежда инулиндълговерижна форма (до 60 молекули фруктоза), чиято метаболизация трае около 15 часа [12]. Данни от in vitro изследванията с ферментиращи хляба култури, показват как фруктоолигозахаридите специфично се ферментират от Bifidobacterium видове [29]. Така фруктоолигозахаридите стимулират растежът на тези микроорганизми [10]. Тези данни са допълнително потвърдени при in vivo експеримент с хора доброволци, които са поемали фруктоолигозахарид и инулин в количества от 15g на ден [22,30,33]. Хората, хранени с фруктоолигозахариди и инулин подобряват здравословното си състояние и се увеличава количеството на Bifidobacterium във фекалиите им [17]. За инулина е показано, как намалява колити при опити с мишки [45]. Способността за усвояване на подобно разнообразие от субстрати показва как Bifidobacterium притежават редица специфични глюкозидази, които променят храните и позволяват тези бактерии да се приспособят и съревновават за средата с променливи условия [11]. В in vivo опити, храненето с 5% на грам тегло (w/l) галактоолигозахариди при мишки и хора води до увеличаване количеството на бифидобактериите и лактобацилите и намаляване количеството на ентеробактериите [16;38]. По данни на [27] е показано, че от трите изследвани вида Lactobacillus rhamnosus, L. plantarum и Lactococcus lactis единствено видът L. plantarum е способен да метаболизира ксилоолигозахаридите, в резултат на което като краен продукт се продуцира повече етанол в сравнение с метаболизирането на други въглехидрати. Необходимо е да се отбележи, че пребиотиците проявяват антиканцерогенна активност (фиг.1), която не е напълно изяснена, като се смята, че голямо значение за това има образуването на бутират. Бутиратът е основен източник на енергия за епителните клетки на червата, а ниската му концентрация е причина за диференциацията на животинските клетки, което води до поява на карценоми по чревните клетки [40]. Днес е изключително голям интереса към метаболитната функция на бутирата и той е предмет на значителни изследвания относно активността му като продукт от метаболизирането на пребиотиците. Чрез опити върху животни и in vitro опити е показано, че млечнокиселите бактерии обитаващи стомашно-чревния тракт могат да инактивират някои карциноми, директно да инхибират нарастването на някои тумори и да инхибират бактериите, които могат да превръщат некарциномите в карциноми [32]. Taper et.al. [42] съобщава, как бавно нараства броят на имлантираните тумори при мишки хранени с инулин. Според Fontaine et.al. [21] инулина стимулира продуцирането на сулфомицин и намаляване на сиаломицина при плъхове и редуцира риска от рак на червата. Разпространения на тумори в дебелото черво и в други органи, като рак на гърдата при плъхове и мишки, метастази в белия дроб се намаляват при добавяне инулин или олигофруктоза от 5 до 15% [43]

4 За предпазване от ракови заболявания се дискутират следните механизми: 1. Продуциране на къси вериги мастни киселини в резултат на ферментацията на пребиотиците. По-киселото ph и модулиране на чревната флора, особенно растежната стимулация на въглехидратите ферментирани от бактериите намаляват концентрацията на токсини, мутагени или геннотоксични субстрати, бактериални метаболити, както и източници на вторични жлъчни киселини и ензими промотиращи карценоми; 2. Бутиратът поддържа регенерацията на чревния епител; 3. Имунна модулация. Дали тези механизми са приложими за човешкото здраве и предпазване от рак е въпрос, на който днес все още е трудно да се отговори. Пребиотичните олигозахариди могат също да подпомагат увеличаването на концентрацииите на калций и магнезий в червата (фиг.1). Ниското ph в червата подобрява абсорбцията на тези минерали в дебелото черво и това вероятно се дължи на увеличаване на разтворимостта им. При опити с плъхове [39] е показано как при ниско ph се увеличава минерализацията на костите, инхибира се разрушаването им и се предпазва костната структура. Положителният ефект от костна минерализация е демонстриран още и при опити с прасетa [39] и хора [3,19]. Това може да има положителен ефект за профилактиката на остеопорозата и остеопенията [35,36]. Повишаването концентрацията на калция в червата подпомага за контролиране формирането на неразтворим жлъчен раствор или соли на мастните киселини. Това може да редуцира потенциалния вреден ефект на жлъчният сок или мастните киселини върху всмукването в червата [35]. Вероятната антимикробна активност на пребиотиците може да даде отговор за промоторният им ефект върху увеличаване популацията на бифидобактериите и лактобацилите (Фиг.1). Те продуцират антимикробни субстанции и стимулират антигенната специфичност и неспецифичност на имунния отговор. При опити с мишки хранени с инулин или олигофруктоза за 6 седмици се наблюдава увеличаване на Т- клетъчната активност, висока резистентност срещу микробни инфекции и ниска смъртност, когато са заразени с Canida albicans, Listeria monosytogens, Salmonella Typhimurium [8]. При плъхове с химично индуцирани колити прилагането на инулин води до антивъзпалителен ефект и редуцира повреждането на чревната лигавица [45]. В in vivo опити с хора олигофруктозата има имуностимулиращ ефект [9]. Използвато на синбиотик, съдържащ галактоолигозахарид в комбинация с B. breve и L. casei има имунотрофичен ефект при инфекции на деца с ларинготрахео-езофагелазни проблеми [28]. Пребиотиците могат да намаляват нивото на някои нисши триглицериди, но механизмът на този ефект е неизвестен [15]. Според Jackson et.al. [26] олигофруктозата инхибира чернодробната липогенеза при мишки и последователно индуцира хипотриглицериден ефект. Потенциалният механизъм на този ефект включва метаболитно или генетично влияние на къси вериги карбоксилни киселини, ниска глицемия или инсулинемия или и двете. Намаляването на синтезата на триглицеридите от хепатоцитите de novo е една хипотетична възможност. Пребиотиците могат също да намалят нивото на общият холестерол и на LDL холестерола в някои случаи. Отново механизма на възможния ефект е неясен. Пропионатът, продукт на олигозахаридната ферментация в дебелото черво може да инхибира специфичната редуктаза, която е лимитиращият етап в холестеролната синтеза (фиг.1). Възможно е пребиотиците да влияят върху количеството на глюкозата в кръвта по няколко начина. Олигозахаридите могат да намалят времето за изпразване на стомаха и/или да намалят времето за преминаване през тънките черва. Този път може да бъде за сметка на продуцираните късоверижните мастни киселини от олигозахариди в червата. Късо верижните мастни киселини в червата могат да

5 инхибират «стомашния глад» при консумация на различни храни. Тези мастни киселини също стимулират контракциите в илеума и съкращават изпразването му [20]. Като допълнение пропионат може да се инхибира глюконеогенезата чрез метаболитната си конверсия до метилмалонил-коа и сукцинил-коа. Тези метаболити могат да инхибират пируват карбоксилазата. Пропионатът може да намалява равнищата на свободните мастните киселини в плазмата. Високите нива на свободните мастни киселини намаляват усвояването на глюкозата и индуцира инсулинова резистентност. Накрая пропионатът може да стимулира гликолизата чрез метаболизирането на цитрата в хепатоцитите. Цитратът е алостеричен инхибитор на фосфофруктокиназата [5,17]. Поради ферментации в дебелото черво, приемането на високи количества пребиотици може да доведе до събиране на газове в червата и стомаха, коремни смущения, диарии и други нежелани реакции. При in vivo експерименти с 80 възрастни хора доброволци, приемащи големи количества олигофруктоза или инулин, се наблюдава най-малко един от следните симптоми (главоболие, уригване, събиране на газове, чревни контракции или стомашни растройства) [4]. Тези странични ефекти на пребиотиците се наблюдават при приемане на 31-41g олигофруктоза или инулин, отговарящи на 0,04-0,06 g / на kg телесно тегло. Остава спорен въпросът дали тези странични ефекти са свързани със състава на чревната микрофлора на всеки човек или високата чувствителност към газовете и другите продукти на пребиотичната ферментация. ЛИТЕРАТУРА [1] Коршунов В.М., Володин В.В., Ефимов Б.А Дисбактериозы кищечника. 1,с [2] Румянцев А.Г Дисбактериоз как индикатор здоровья и показание к терапии у детей: Национальный миф и научная реалность. // Детская болъница, 1, с [3] Abrams SA, IJ Griffin, KM Hawthorne, L Liang, SK Gunn, G Darlington, KJ Ellis A combination of prebiotic short- and long-chain inulin type fructans enhances calcium absorbtion and bone mineralizaion in young adolescents. Am J Clin Nutr 82: [4] Absolonne J., M Jossart, P Coussement, M Roberfroid Digestive acceptability of oligofructose. Proc 1 Orafti Research Conf pp [5] Amarowicz R Nutritional importance of oligosaccharides. Article in Polish. Rocz. Panstw Zaki Hig. 50: [6] Angus F., S. Smart and C. Shortt Prebiotic ingredients with emphasis on galacto-oligosaccharides and fructooligosaccharides. In Probiotic Dairy Products ed. Tamine, A. pp Oxford: Blackwell Publishing. [7] Balongue J., C. Schumann, P. Quignon Scand. J. Gastroenterol. 32, Suppl.222, pp [8] Buddington KK, JB Donahoo, RK Buddington Dietary oligofructose and inulin protect mice from eneric and systemic pathogtens and tumor inducers. J Nutr 132: [9] Bunout D., S. Hirsch, M Pia de la Maza, C. Munoz, F. Haschke, P. Steenhout, P. Klassen, G. Barrera, V. Gattas, M. Petermann Effegts of prebiotics on the immune response to vaccination in the elderly. J Parenter Enteral Nutr 26: [10] Casas, I. A., F. W. Edens, and W. J. Dobrogosz Lactobacilus reuteri: an effective probiotic for poultry and other animals, p In W. Salminen and A. Von Wright (eds.), Lactic acid bacteria: microbiological and functional aspects. Marcel Dekker, Inc, New York

6 [11] Crittenden, R.G Prebiotics. p In G.W. Tannock (ed.), Probiotics: a critical review. Horizon Scientific Press, Wymondham, pp , Norfolk, United Kingdom. [12] Crittenden, R, A Laitila, P Forssell, J Matto, M Saarela, T Mattila-Sandholm, and P Myllarinen Adhesion of bifidobacteria to granular starch and its implications in probiotic technologies. Appl Environ Micobiol 67: [13] Cumming J, G. T. Macfarlane, H.N. Englyst. Prebiotic digestion and fermentation Am. J Clin Nutr; 73, pp. 415S-20S. [14] Cummings J., J. Rombeau, T. Sakata Phisiological and clinical aspects of short chain fatty acids. Cambridge, United Kindom: Cambridge University Press. [15] Delzenne N., K. Nadine Effects of fructans-type prebiotics on lipid metabolism. Am J Clin. Nutr;73:456S-8S. [16] Gibson G.R., J.M. Saavedra, S. MacFarlane, G.T. MacFarlane Probiotics and inyestinal infection: In Probiotics 2: Applications and practical aspect, R. Fuller (Ed.), Chapman and Hall, London, pp [17] Gibson G.R Dietary modulation of the human gut microflora using the prebiotics oligofwtose and inulin. J. Nutr. 129(7) Suppl:1438S-41S. [18] Gibson, G.R., H.M. Probert, JAE van Loo, MB Roberfroid. Dietary Modulation of the human colonic microbiota: Updating the concept of prebiotic.2004 Nutr Res Rev 17: [19] Griffin IJ, PM Davila, SA Abrams Non-digestible oligosaccharides and calcium absorbtoin in girls with adequate calcium intake. Brit J Nutr 87: [20] Gruzard D., C. Barthomeuf Non-digestible oligosaccharides used as prebiotic agents: mode of production and benefical effects on animal and human health. Reprod Nutr. Dev.39: [21] Fontaine N., J.C. Meslin, S. Lory, C. Andrieux. Intestinal mucin distrution in the germ-free rat and in heteroxenic rat harbouring a human bacterial flora: effect of inulin in thendiet Br J Nutr;75,pp [22] Furrie E., S. Macfarlan, A. Kennedy, J.H. Cummings, S.V. Walsh, O`Neil D.A. and G.T. Macfarlane Synbiotic therapy (Bifidobacterium longum/synergy 1) initiates resolution of inflammation in patients with active ulcerative colitis: a randomised controlled pilor trial. Gut 54: [23] Hartemink R., K.M.J. van Laere, F.M. Rombouts J Appl. Microbiol., 83: [24] Havenaar J.H., J. Huis in`t Veld Probiotics: A general view. In: The lactic acid bacteria in health disease. B.J.B. Wood (Ed.), Elsevier Aplied Science, London, pp [25] International Food Information Council (IFIC), Functional foods facts sheet probiotics and prebiotics. [26]Jackson K.G., R.J. Taylor, A.M. Clohessy, C.M. Williams The effect of the daily in take of inulin on fasting lipid, insulin and glucose concentration in middle-aged men and women. Br J Nutr,82,pp [27] Kontula P., A. Suihko, V. Wright, T. Mattila-Sandholm The effect of lactose derivatives on intestinal Lactic acid bacteria. VTT Biotechnology and Food Research,82,pp [28] Kanamori Y., K Hashizume, M Sugiyama, M Morotomi, N Yuki, R Tanaka A novel synbiotic therapy dramatically improved the intestinal flora of a pediatric patient with laryngotracheo-esophageal cleft (LTEC) in the intensive care unit. Clin Nutr 21: [29] Van Laere, K. M., R. Hartemink, M. Bosveld, H. A. Schols, and A. G. Voragen Fermentation of plant cell wall derived polysaccharides and their corresponding oligosaccharides by intestinal bacteria. J. Agric. Food Chem. 48:

7 [30] Langlands S.J., M.J. Hopkins, N. Coleman and J.H. Cummings Prebiotics carbohydrates modify the mucosaassociated microflora of the human large bowel. Gut 53: [31] Latella G Gastroenterol. Int.11, pp [32] Macfarlane G.T., and J.H. Cummings Probiotics and prebiotics: can Regulating the activities of intestinal bacteria benefit health? Br. Med. J. 318: [33] Macfarlane S. and J.F. Dillon Microbial biofilms in the human gastrointestine tract. J of Appl. Microbiol. Accepted ( ). [34] Ogueke C.C., C.I. Owuamanam, N.C. Ihediohanma, J.O. Iwouno Probiotics and Prebiotics: Unfolding prospects for better human health. Pakistan Journal of nutrition (9): [35] Roberfroid M.B Prebiotics and synbiotics: concepts and nutritional properties. Br. J. Nutr.80 (Suppl.2):S197-S202. [36] Roberfroid, M Probiotics and prebiotics: are they functional foods?. Am J Clin Nutr 71(suppl):1682S-7S. [37] Roberfroid M.B. Prebiotics: the concept revisited J Nutr 137: [38] Rowland I.R Metabolic interaction in the gut. In: Probiotics. The scientific basis, R. Fuller (Ed.), Chapman and Hall, London, pp [39] Scholz-Arhens K., G. Schaafsma, E. van den Heuval, J. Schrezenmeir Effects of probiotics on mineral metabolism. American Journal of Clinical Nutrition, 73,pp [40] Tanaka Y., K. Buch, T. Eguchi, N. Ikekawa, T. Takaguchi, Y. Kobayashi, P.J. Higgins Arch. Biochem. Biophys., 276: [41] Tannock, G. W., ed A fresh lokk at the intestinal microflora. In:Probiotics: a critical review. Horizon Scientific Press, New York, Wymondham, pp [42] Taper H.S., N.M. Delzenne, M.B. Roberfroid.1997.Growth inhibition of transplantable mouse tumors by non-digestible carbohydrates. Int J Cancer; 71,pp [43] Taper H.S., M.B. Roberfroid Inulin/Oligofructose and anticancer therapy. Brit J Nutr 87: [44] Wolever T.M.S., P. Spadafora, H. Eshuis Am.J. Clin. Nutr., 53: [45] Videla, S., J. Vilaseca, M. Antolin, A. Garcia-Lafuente, F. Guarner, E. Crespo, J. Casalots, A. Salas, and J. R. Malagelada Dietary inulin improves distal colitis induced by dextran sodium sulfate in the rat. Am. J. Gastroenterol. 96: Благодарност: Изследванията са осъществени със средства по проект на МОН РНФ и РД / от Фонд научни изследвания на Шуменски университет Еп. К. Преславски. За контакти: Доц. д-р Цветеслава Игнатова-Иванова,Катедра Биология, Шуменски университет Еп. К. Преславски, тел: , е-mail: radi_cvet@abv.bg Доц. д-р инж. Радослав Иванов, Катедра Органична химия и технологии, Шуменски университет Еп. К. Преславски, тел: , е-mail: radoslav@shubg.net Доц. д-р Илия Илиев, Катедра Биохимия и микробиология, Пловдивски университет Паисий Хилендарски,тел: е-mail: ilievini@abv.bg Проф. дбн Искра Иванова, Катедра Обща и промишлена микробиология, Софийски университет Св. К. Охридски, тел: , е- mail:vitanova@biofac.uni-sofia.bg. Докладът е рецензиран