МАС СПЕКТРОМЕТРИЯ ПРИЛОЖЕНИЕ В МЕДИКО-БИОЛОГИЧНИ ИЗСЛЕДВАНИЯ

Приложение на високоразделителни течна хроматография и мас спектроскотия за охарактеризиране на биологично активни вещества, природни продукти и функционални храни Акад. Проф. Ваньо Митев дм, дбн Доц. инж. Валентин Лозанов дб МУ-София, Катедра Медицинска Химия и Биохимия

Аналитичен метод за измерване на молекулното маса на вещество Х m/z m = молекулна маса z = заряд на молекулата Y относителна интензивност

Какво прави мас спектрометъра? измерва молекулната маса най-прецизно от всички други техники. дава информация за химичната структура на изследваното вещество (проба) За какво може да се използва мас спектрометъра? За идентификация, потвърждение и количествено определяне на: метаболити, протеини,вещества изолирани от естествен източник, пептиди, захариди, липиди, нуклеотиди, лекарствени вещества, синтетични органични вещества, полимери всички органични вещества които могат да се йонизират

КАК РАБОТИ МАС СПЕКТРОМЕТЪРА? - Въвеждане на пробата в апарата - Генериране на йони в газова фаза - Разделяне на йоните в мас анализатора на база m/z - Детектиране на йоните - Обработка на резултата проба Вакум система йонизатор Мас анализатор детектор

КАК СЕ ДЕФИНИРА МАСА? За определяне на числената стойност на присъщото свойство на веществата "маса" като отправна точка се използва въглерод-12, 12 C. Единицата за маса се изразява в Далтон (Dalton, Da). ЕДИН ДАЛТОН СЕ ДЕФИНИРА КАТО 1/12 ОТ МАСАТА НА ЕДИН АТОМ ВЪГЛЕРОД - 12. Element Mass Abundance H 1.78 2.141 99.985%.15 C 12. 13.34 98.89 1.11 N 14.31 15.1 99.64.36 15.9949 16.9991 17.9992 99.76.4. Така, един въглероден атом (С) има маса от 12. Da.

Intensity ИЗОТОПИ Повечето елементи имат повече от един стабилен изотоп ЗАЩО ТОВА Е ВАЖНО? Мас спектрометъра може да види тези изотопи ако има достатъчно висока разделителна способност. Колкото по-висока е разделителна способност на мас спектрометъра толкова по-прецизно е измерването. tt_21_3 #1148 RT: 14.16 AV: 1 NL: 1.93E8 F: FTMS + p ESI Full ms [3.-.] 131.54 herb_2_ #1647 RT: 15.79 AV: 1 NL: 7.92E5 F: ITMS - p ESI Full ms [.-.] 427.42 W=395.2mmu 2311_2 #149 RT: 1. AV: 1 NL: 1.18E8 F: FTMS + p ESI Full ms [.-.] 1147.53 95 9 85 131.47 95 9 85 11 1 1 9 1147.33 1147.73 75 7 65 55 45 132.54 75 7 65 55 45 9 8 7 7 6 5 1147.13 1147.93 1148.13 35 3 35 3 3 1148.33 25 15 1 5 25 428.45 133.55 W=448.5mmu 15 131.64 133.46 1 429.42 132.64 134.55 W=2.7mmu 5 426.4 131. 132.42 133.9 133.74 134.9 134.84 135.39 W=1.6mmu 131. 131.5 132. 132.5 133. 133.5 134. 134.5 135. 426. 426.5 427. 427.5 428. 428.5 429. 429.5 43. m/z m/z Моноизотопна маса 3 1 1148.53 1146.93 1148.73 1148.93 1149.13 1146.72 1149.33 1149.53 1146.5 1147. 1147.5 1148. 1148.5 1149. 1149.5 m/z Средна маса

Няколко важни характеристики Масов обхват (Mass range): Какъв обхват от маси може да се измерят? Разделителна способност (Resolution): Колко добре са разделени масовите пикове? Точност на измерване на масата (Mass accuracy): Колко точно е измерена дадена маса спрямо теоретичната? Динамичен обхват (Dynamic range): Каква е разликата между най-ниско и най-високо интензивните масови пикове, които могат да се измерят в единичен скан? Чувствителност (Sensitivity): Колко е най-малкото количество вещество което може да се измери

Intensity Intensity Разделителна способност R=M/ M (m/z)/ (m/z) 2311_2 #747 RT: 7.36 AV: 1 NL: 7.94E4 F: FTMS + p ESI Full ms [.-.] 7 7 6 5 379.294 R=339 W=11.2mmu 3 3 full width 1 378.7188 R=3294 W=11.5mmu 379.7483 R=3574 W=1.6mmu 3.688 R=334 W=11.3mmu 378.4 378.6 378.8 379. 379.2 379.4 379.6 379.8 3. 3.2 3.4 m/z M=FWHM 2311_2 #1767 RT: 16.13 AV: 1 NL: 4.E5 F: FTMS + p ESI Full ms [.-.] 1713.96497 R=194 4 W=157.2mmu Half mass 3 3 3 3 3 2 1713.84338 R=194 W=89.2mmu 1 1 1 1 1714.21973 R=54 W=295.4mmu 1716.2966 R=84 W=194.9mmu 1716.21411 R=814 W=211.8mmu 1714. 1714.5 1715. 1715.5 1716. m/z

Cuts Точност на измерване ppm= (M измерена - М теоретична )/М теоретична х 1 6 Точността на измерената маса пряко зависи от разделителната способност. Колкото е по-висока разделителната способност толкова по-точно се измерва масата. ppm<.5 Resolution =1 ppm< 5 Resolution = 3 ppm< Resolution = 1 28 2845 28 2855 Mass (m/z)

ТИПОВЕ МАС СПЕКТРОМЕТРИ Йонизатор ESI MALDI CI APCI APPI EI PD FAB SELDI Мас анализатор Magnetic Sector Time of flight (TF) Quadrupole Ion Trap Linear Ion Trap rbitrap

Електроспрей йонизация (El) налягане = 1 atm диаметър = um ниско напрежение Градиент на вакума N 2 Проба в разтвор N 2 газ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + MH + MH 2 + MH 3 + Високо напрежение (~4 kv) Заредени капки

rbitrap принцип на работа Makarov A. Anal. Chem., 72, 1156-1162 - теоретична обосновка 5г - LTQ rbitrap Discovery първият търговски апарат на пазара.

Тандем (MS/MS) мас спектроскопия йонен източник Мас анализатор 1 колизионна клетка Мас анализатор 2 Изолиране на йон(и) фрагментиране детекция на фрагментните MS 1 колизия MS 2 йони gas MS gas gas MS/MS - йонни фрагменти на изолиран в MS1 йон(и) MS/MS - йон(и) в MS1 които имат фрагмент Х в MS2 MS/MS - йони имащи идентични неутрални фрагменти (MS1-MS2) В зависимост от типа на мас анализаторите има различни типове тандем мас апарати: Triple quadrupole (QqQ; QQQ), Q TF, Q Trap,TF - TF LTQ rbitrap Q rbitrap (QExactive)

Приложение на мас спектроскопия в метаболитни изследвания Метаболом съвкупност от всички метаболити в клетката, тъканите, органите и организма, които са крайни продукти на клетъчни процеси ( обикновено се отнася за вещества под Da) и играят съществена роля за нормално функциониране на живия организъм Създаване на карта - отпечатък на всички метаболити в конкретен жив организъм - амбициозна цел Метаболити - изключително разнообразие от химични вещества (амино киселини, гликозиди, липди, пурини, фосфати и много други) Силно динамична система променяща се понякога за секунди. Липса на универсални подходи за анализ различните класове химични съединения изискват специфични аналитични подходи Голямото разнообразие от вещества и липсата на директна генетична информация затруднява създаването на ефективни бази данни.

Количествен анализ на аминокиселини и биогенни амини чрез мас спектрометрия след дериватизация F F N R R 1 H(R)NH N пробоподготовка екстракция N FAESC Boric buffer ph 9-1, ACN R NH R 1 дериватизация Плазма, урина, клетъчни лизати, тъкани, продукти от животински и растителен произход мас анализ MS or MS/MS компютърен анализ NL: 2.44E8 Base Peak F: 9 FTMS + c ESI Full ms [.-.] MS 1411_9 7 резултати 3 1

D:\Analytical\aapa\AAPA_new\AAPA_27_8 7/26/18 17:3:3 RT:. - 7.1 4.95 4.91 NL: 7.13E7 655.23145-655.24455 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 RT:. - 7.1 4.62 NL: 4.97E7 699.2211-699.23499 F: FTMS + p ESI Full ms [1.-1.] MS AAPA_27_8 RT:. - 7.1 3.9 NL: 1.63E8 359.1141-359.1859 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 RT:. - 7.1 3.34 NL: 1.17E8 439.13861-439.14739 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 1 1 3.59 4.2 5.7 6.48 5.9 NL: 9.43E7 669.24731-669.269 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 4.28 3.39 3.34 3.12 3.69 5.9 5.54 6. 5.85 6. 6. 5.28 6.25 1 2 3 4 5 6 7 4.59 5.19 6.59 NL: 2.75E8 395.145-395.15595 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 3.74 4.35 4.91 4.95 5.39 6.32 NL: 2.E7 995.3515-995.3795 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 NL: 6.78E6 1335.47165-1335.49835 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 NL: 2.5E8 5.15795-5.165 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 NL: 2.79E8 414.18986-414.19814 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 NL: 6.24E7 444.16856-444.17744 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 3 1 1 2.8 3.39 1 2 3 4 5 6 7 4.87 6.53 4.49 NL: 9.31E7 488.15812-488.16788 F: FTMS + p ESI Full ms [1.-1.] MS AAPA_27_8 3.68 4.81 5.45 4.68 3.77 3.74 4.87 5.76 3.15 4.7 5.31 3.99 4.31 4.62 6.1 6.53 4.43 NL: 1.18E8 421.15279-421.16121 F: FTMS + p ESI Full ms [1.-1.] MS AAPA_27_8 3.74 5.63 NL: 5.82E7 713.23687-713.25113 F: FTMS + p ESI Full ms [1.-1.] MS AAPA_27_8 NL: 1.21E8 415.12685-415.13515 F: FTMS + p ESI Full ms [1.-1.] MS AAPA_27_8 NL: 1.62E8 387.13213-387.13987 F: FTMS + p ESI Full ms [1.-1.] MS AAPA_27_8 1 1 3 1 2.29 4.22 5.62 3.93 4.2 3.75 4.65 6.9 6.82 4.16 NL: 1.86E8 399.131-399.13999 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 3.19 4.44 5.48 6.25 4.6 4.29 4.94 5.42 3.27 4.7 4.85 6.23 6.75 4.28 NL: 1.28E8 433.11967-433.12833 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 2.52 4.62 4.49 3.71 4.82 6.44 1 2 3 4 5 6 7 NL: 8.14E8 373.11627-373.12373 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 NL: 8.21E7 465.14235-465.15165 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 NL: 2.31E8 1.14799-1.151 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 NL: 4.E8 415.16285-415.17115 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 3.55 4.21 5.13 6.48 4.56 NL: 1.54E8 449.14751-449.15649 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 3.53 4.72 3.34 3.68 4.16 4.46 3.22 3.86 4.15 3.68 3.77 3.21 3.75 3.27 4.7 4.76 5.94 3.78 3.41 4.2 5.23 3.78 3.44 4.21 3.84 3.62 4.9 1 2 3 4 5 6 7 NL: 1.3E8 458.142-458.18958 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 NL: 5.65E7 416.12184-416.1316 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 NL: 8.E6 43.1377-43.1463 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 NL: 1.6E8 389.11111-389.11889 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 NL: 6.42E7 417.1583-417.11417 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 NL: 8.67E7 431.12169-431.1331 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8 NL: 1.8E8 3.12697-3.133 F: FTM S + p ESI Full ms [1.-1.] M S AAPA_27_8

Area Количествен анализ на антиоксиданти в билкови екстракти чрез LC - HRMS D:\Analytical\antiox\antiox new\78_7 8/7/18 17:59:4 RT:. - 8.2 1 1 6.74 6.67 7.22 NL: 1.42E8 TIC F: FTMS - p ESI Full ms [1.- 7.] MS 78_7 78_7 #536-578 RT: 4.31-4.72 AV: 3 NL: 3.38E6 T: FTMS - p ESI Full ms [1.-7.] 174.9529 3 78_7 RT:.1-8.2 Mass:. - 7. NL: 1.93E7 F: epicatechin Y = 8823.1*X R^2 =.9975 W: Equal.41.55.69 6.36 6.16 5.44 2.81 7.35 3.9 2.65 3.46 4. 5.1 2.31 7.46 4.36 2.14 1.96 1 2 3 4 5 6 7 8 1 212.7188 293.17253 233.15145 39.1673 329.22958 447.12899 567.11 639.1776 1 2 3 3 4 5 6 7 m/z 1 2 3 4 5 6 7 8 m/z RT:. - 8.2 SM: 11G 2.87.33 1. 1.66 2.23 3.43 4.9 4.64 5.48 5.93 6.46 6.94 7.42 3.24.49.71 1.41.33 1.13 1.65 2.53 2.37 1.29 2.89 2.15 2.3 2.21 4.5 4.64 5.77 6.23 7.38 3.9 4.56 2. 3.67 4.76 2.77 3.31 3.81 4.57 5.3 5.56 2.71 3.18 3.72 4.22 4.91 5.73 6.19 6.7 2.27 3.3 3.65 4.37 4.87 5.37 5.84 6.71 7.42 1 2 3 4 5 6 7 8 7.67 RT:. - 8.2 SM: 11G.52 1.54 2.62 2.64 2.67 2.75 2.58 2.31 2.95 3. 3.72 4.88 5.12 5.76 6.67 6.91 7.63.1 1.32 2.34 2.37 2. 2.3 2.52 2.73 3.22 3.68 6.67 6.74 2.6 4. 5.5 6.82 5.37 7.59 3.11 3.12 3.14 3.8 3.18.51 1.36 1.96 2.56 3.3 3.37 3.58 4.33 4.81 5.67 6.14 6.71 6.95 2.65 1. 2.68 2.7 2.62 2.74 2.89 2.61 2.62 2.64 2.58 2.68 2.31 2.53 2.83 3.6 2.42 2.43 2.46 2.39 2. 2.34 2.62 2.34 2.31 2.33 2.28 2.42.51 1.93 2.53 2.74 3.49 4.21 4.56 5.28 5.59 6.18 6.63 7.37 2.48 2.45 2.49 2.53 2.42 2.21 2.68 2.9 3.64 4.36 4.62 5.44 5.76 6.39 6.9 7.12 1 2 3 4 5 6 7 8 RT:. - 8.2 SM: 11G 2.49 1.26 3.12 5.47 6.42 2.33 3.46 4.25 5.29 6. 7.41 3. 2.87 2..53 1.96 2.64 4.15 5.11 6.12 7.6 3.55 4.34 5.15 6.66.53 2.3 3.61 5.27 3.11.55.45 2.3 4.25 5.5 5.87 6.74 7.58 3.45 NL: 3.64E6 271.5629-271.6171 F: FTMS - p ESI Full ms [1.-7.] MS 78_7 1.66 2.65 4.37 5.36 6. 7.15 1 2 3 4 5 6 7 8 NL: 1.37E6 463.7837-463.8763 F: FTMS - p ESI Full ms [1.-7.] MS 78_7 NL: 3.11E5 169.931-169.1269 F: FTMS - p ESI Full ms [1.-7.] MS 78_7 NL: 4.46E6 269.3931-269.4469 F: FTMS - p ESI Full ms [1.-7.] MS 78_7 NL: 2.33E6 317.2383-317.317 F: FTMS - p ESI Full ms [1.-7.] MS 78_7 NL: 2.13E6 33.4697-33.533 F: FTMS - p ESI Full ms [1.-7.] MS 78_7 NL: 5.23E6 285.3415-285.3985 F: FTMS - p ESI Full ms [1.-7.] MS 78_7

Intensity Intensity Използване на високоразделителна мас спектрометрия и биоинформатика за доказване на произход на билков екстракт приложение при Portulaca oleraceа L. (тученица) d:\analytical\...\bg_1611_7_1611161324 11/16/16 13:25:4 blank % MeH new column RT:. - 28.1 3 3.52 NL: 4.12E9 TIC F: FTMS - c ESI Full ms [1.-.] MS BG_1611_8 9.49 9.27 8.78 1 9.62 1.66 19.18 7.99 8.21 11.52 1.52 1.76 9.75 21.5 21. 6.22 6.84.84 23.45 1.83 1.25 11.65 18.37 12.65.72 21.79 24.48 1.94 6.96 27.27 2.94 4. 5.54 5.7 13.38 15.42 16.8 17.93 24.72 26.28 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 11 12 13 14 15 16 17 18 19 21 22 23 24 25 26 27 28 RT:. - 28.1 6 5 21.82 NL: 6.84E9 TIC F: FTMS + c ESI Full ms [1.-.] MS bg_1611_7_16111 61324 3 3 1.51 1.25 12.65 21.32 8.78 22.24 21.8 22.64 9.28.89 19.56 19.23 22.75 8.19 12.62 24.6 7.35 9.35 12. 15. 15.74 11.64 11.12 18.63.43 6.95 22.86 14.63 16.73 24.39 12.9.76 6.34 1.62 6.46 24.87 2.15 4.29 3.92 25. 27.8 2 4 6 8 1 12 14 16 18 22 24 26 28 Изследвани 36 проби от различни региони на страната и Гърция Доказано наличие на 1832 индивидуални вещества в пробите

Сравнителен анализ на кисели млека произведени чрез различни шамове на Lactobacillus bulgaricus Изследвани 15 проби получени при използване на различни естествени шамове на Lactobacillus bulgaricus Идентифицирани 8 индивидуални вещества e:\2_15 13.2.17?. 13:5:29?. sample 43 1 dil 2_16 #75 RT: 1. AV: 1 NL: 8.57E7 T: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] 212.7437 RT:. - 1.1 2.6 2.1 A Въглехидратен профил NL: 5.4E9 TIC F: FTMS - p ESI Full ms 2.25 [.-1.] 2.43 MS 2_15 112.989 726.7496 113.235 822.57446 95.68823 156.11 248.95 1.12988 511.34946 157.112 1134.62341 E N L 9.8 2 E6 2_15#236 RT: 3 97 9 2.42 AV: 1 F: FTMS - p ESI 1 Fu ll m s 2 1 3.16@ hcd. m/z [5. -5 3. 161.4448 2_15 #9 RT: 2.22 AV: 1 NL: 7.27E7 T: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] 341.194 263.7748 342.11246 1 383.11987 3.12527 3.93945 221.6628 3.16138 343.11398 179.5522 N L : 7.2 2 E6 339.5 3. 3.5 341. 341.5 342. 342.5 343. 2_15#2 RT: 343.5 2.3 AV: 1 F: FTMS - m/z 9 p ESI Fu ll m s 2 3.16@ hcd. [5. -5 3. ] 2_15 #218-233 RT: 2.29-2. AV: 8 NL: 5.77E7 161.4448 T: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] 7 3.16213 11.2295 3 221.6631 4.16572 341.1916 488.16255 496.17895 5.1678 492.13437 499.12883 512.16183 515.297 1 521.17255 524.18 529.112 533.138 323.9897 425.13269 3.16599 485 49 495 5 51 515 5 525 53 535 2_15 #389 RT: 3.74 AV: 1 NL: 3.25E6 T: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] 664.23242 665.21527 m/z 7 3 666.21875 179.5524 3 m /z 667.2217 RT:. - 1.1.13.56.88 1.29 1.82 2.57 4.97 5.3 7.91 2.78 4.61 8.3 9.24 9.14 9.29 3.76 3.14 5.23 5.49 6.56 6.76 6.99 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 RT:. - 1.1 SM: 11G 2.25 2.44 1.44.9 6.7.48 6.98 4.22 4.97 5.33 7.85 6.14 8.72 5.64 9.2.89 9.69 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 RT:. - 1.1 SM: 11G 2.31 2.44 2.99 3.7 4.21 6.87 7.37 2.3 5.5 5.56 7.85 5.94 6. 8.89 9.64 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 SM: 11G 2.32 2.45 3.73 2.99 4.41 4.84 моно три тетра B C D 5.57 7.87 6.35 7.26 9.84 NL: 8.E7 NL: 7.1E7 NL: 5.45E6 341.1539-341.11221 F: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] MS 2_15 3.15667-3.16673 F: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] MS 2_15 665.5-665.22135 F: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] MS 2_15 663.5 664. 664.5 665. 665.5 666. 666.5 667. 667.5 668. 668.5 m/z 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 Лактозни изомери при Lb. bulgaricus шам 43

Изследване структурата на неизвестни вещества чрез MS n MS MS/MS MS 3 Хроматографски чисто вещество изолирано от Geranium sanguineum (кръвен здравец) Селективен каспаза-3 инхибитор 6.43 MS 4 MS 5 4 5 6 7 8 9 1 (R) H (R) H 2-hydroxy-2,3-dihydrogenistein R = H, pentose

Идентификация на онечиствания и замърсявания в търговски продукти brij_58_1512-4 #713 RT: 9.53 AV: 1 NL: 7.56E7 T: FTMS + p ESI Full ms [1.-1.] 95 9 85 8.78534 лош търговски вид на спиртна напитка (опалесценция (утайка)) 75 7 65 824.76984 876.13 RT: 1.76 55 45 35 92.81653 липидно онечистване в захар.3% 3 25 15 1 5 447.14536 792.547 191.6726 5.43616 551.33 699.59589 936.89471 988.92743 7 9 1 m/z 8 9 1 11 12 13

Идентификация на известни вещества в сложни смеси (анаболни вещества в хранителни добавки) C H 3 C H 3 H H H 1,4-Androstadiene-3,17-dione H 3 C H 3 C H H Androstenedion H sample androstenedion 1,4-androstadien-3,17-dione П-Ccjl1523 detected * detected П-Ccj11111 detected * detected tt П-4 vsv n. d. n. d. Capsules # detected * detected Gul - 1322 n. d. n.d. Guggul(synth) 111 n. d n. d NSU 5122-LCE n. d n. d

D:\Analytcal\phyto_hormons\PH_7_6 7/6/18 15:1:54 mix 38 1ug std 15 diluted buffer A 1/1 Количествен анализ на фито хормони и растежни регулатори RT:. - 25.2 9 9.64 12.18 12.33 13.9 23.48 NL: 1.19E9 TIC F: FTMS + p ESI Full ms [.- 1.] MS PH_7_6 7 7.23 4.19 1.7 1.89 14.67 3 1 1.38 3.88 17.65 18.11 17.27 5.33 22.92 21.91 9 7 9.17 1.15 11.25 12.69 NL: 3.43E8 TIC F: FTMS - p ESI Full ms [.- 1.] MS PH_7_6 7.25 3 1 23.17 22.12 1.2 13.11 6.28 17.63 21.36 6.21 15.57 1. 5.8 24.74 5 1 15 25 D:\Analytcal\phyto_hormons\PH_7_6 7/6/18 15:1:54 mix 38 1ug std 15 diluted buffer A 1/1 RT:. - 25.2 RT:. - 25.2 RT:. - 25.2 9.64 NL: 1.19E9 1.93 12.33 TIC F: FTMS + p ESI Full ms [.-1.] 23.48 MS PH_7_6 7.23 14.67 1.11 6.96 9. 11.42 18.37 22.29 3.96 9.64 9.15 NL: 1.2E5 187.7126-187.7874 F: FTMS + p ESI Full ms [.-1.] MS 11.42 PH_7_6 9. 8.61 5.33 12.71.97 6. 21.91 1.4 1.38 2.33 21.72 12.33 11.99 11.92 2.41 7.23 13.2 7.76 21.76 1 NL: 5.73E7 2.114-2.123 F: FTMS + p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6 NL: 9.36E7 161.8878-161.9522 F: FTMS + p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6 NL: 8.12E8 33.13-33.116 F: FTMS + p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6 NL: 5.13E3 187.1126-187.1874 F: FTMS + p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6 NL: 6.29E8 226.1348-226.11252 F: FTMS + p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6.37 1.15.21 5.76 3.52 3.99 3.52 9.37 8.53 1.55.24 22.77 8.11 9.22 17.61.43 1.36 7.19 7.4 8.76 1.89 18.11.43 1.86 11.42.17 22.55 1.55 8.46 1.82 18.52 22.29 1.59 12.18 11.72 13.2 22.29 13.9 12.26 13.71 21.76 5 1 15 25 4.31 9.34 9.3 9.68 9.64 12.37 12.49 13.2 21.65 1.28 17.84 22.14.36 12.67.9 13.13.85 14.67.85 7.57 9.22 15.36.43 6.89 11.42.97 23.7 11.53 1.4 6.27 8.31 11.92 17.88.7 7.73 7. 3.96 7. 9.22 11.38 17.54 19.98.41 6.46 12.7 8.53 12.37 18.64.89 5 1 15 25 No Compound MW [M+H]+ [M-H]- 1 GIBBERELLIN A1 348. 349.164565 347.112 2 GIBBERELLIC ACID (GA3) 346.38 347.148915 345.134362 3 GIBBERELLIN A4 332. 333.16965 331.1597 4 GIBBERELLIN A5 33.38 331.154 329.139447 5 GIBBERELLIN A6 346.38 347.148915 345.134362 6 GIBBERELLIN A7 33.38 331.154 329.139447 7 GIBBERELLIN A8 364. 365.15948 363.144927 8 GIBBERELLIN A9 316. 317.174736 315.1183 9 α-naphtaleneacetic ACID (NAA) 186.21 187.75356 185.3 1 N-(2-CHLR-4-PYRIDYL)-N'-PHENYLUREA 247.69 248.58516 246.43963 11 THIDIAZURN (TDZ) 2.25 221.49157 219.344 12 trans-zeatin (tz) 219.25 2.119286 218.14734 13 (±)-cis,trans-abscisic ACID (ABA) 264.32 265.143436 263.128883 14 INDLE-3-ACETIC ACID (IAA) 175.19 176.75 174.552 15 INDLE-3-BUTYRIC ACID (IBA) 3.24 4.1195 2.87352 16 MEPIQUAT CHLRIDE 149.66 114.127726-17 DAMINZIDE (Alar, B-Nine) 1.17 161.969 159.77516 18 INDLE-3-PRPINIC ACID (IPA) 189.22 19.86255 188.7172 19 PACLBUTRAZL 293. 294.136766 292.122214 UNICNAZLE 291.78 292.121116 29.16563 21 FLURPRIMIDL 312.29 313.115839 311.11286 22 ANCYMIDL 256.31 257.128454 255.11391 23 1-TRIACNTANL 438.82 439.487343 437.47279 24 (±)-JASMNIC ACID (JA) 21.28 211.132871 9.118318 25 L-α-[(2-AMINETHXY)VINYL]GLYCINE(AVG) 1.17 161.969 159.77516 26 ERGSTERL (ERG) 396.66 397.346492 395.33194 27 EPIBRASSINLIDE (EBI) 4.69 481.352366 479.337813 28 FLURIDNE 329.32 33.125 328.95472 29 MALEIC HYDRAZIDE 112.9 113.34554 111.1 D:\Analytcal\phyto_hormons\PH_7_6 7/6/18 15:1:54 mix 38 1ug std 15 diluted buffer A 1/1 RT:. - 25.2 RT:. - 25.2 1.15 NL: 3.43E8 9.17 9.17 11.25 TIC F: FTMS - p ESI Full 12.69 ms [.-1.] MS PH_7_6 7.25 22.34 24.74 1.2 6.28 15.57 21.25 7.55 1.5 7.29 8.98 11. 16.18 22.4 8.32 1.2 1.17.31.31 7.48 6.87 11. 14.73 22.8 7. 11.22 9.2 11.94 18.1.4 9. 5.19 9.2 11.1 12.9 18.28 6.28 6.21 5. 7.55 7.55 6.95 1.91. 22.12 12.69 11.33 13. 18.51 12.69 11.33 13. 18.51 5 1 15 25 NL: 5.1E7 347.1436-347.15694 F: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6 NL: 5.98E7 345.1271-345.19 F: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6 NL: 8.83E7 331.14838-331.16162 F: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6 NL: 9.88E7 329.13242-329.14558 F: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6 NL: 1.74E7 363.13674-363.15126 F: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6 NL: 1.26E8 315.1537-315.1663 F: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6 NL: 1.26E8 315.1537-315.1663 F: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6 7.25 6.28 6.13 5.19 8.75 6.48 1.13 6.21 9.24 1.2 9.7 18.1. 6.98 11. 1.15 17.63 24.97 23.2 22.3 21.93 1. 18.1.7 1. 2.27 9.24 12.66 17.52 19. 1.9 1.56 2.23 9.77 1.19 17.63 22.3 9.62 1.2 5.8 8.48 1.15 12.69 22. 5 1 15 25 NL: 9.26E7 263.12374-263.13426 F: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6 NL: 4.31E5 159.6182-159.6818 F: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6 NL: 2.41E8 9.11382-9.12218 F: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6 NL: 2.1E7 159.7382-159.18 F: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6 NL: 7.81E6 111.1778-111.2222 F: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6 NL: 5.9E7 219.2962-219.3838 F: FTMS - p ESI Full ms [.-1.] MS PH_7_6

БЛАГОДАРЯ ЗА ВНИМАНИЕТО

Всичко е ясно!? Някакви въпроси?