CE¤

FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18 Clone EP17/EP30 Ready-to-Use (Link) Код IR094 Предназначение Синоними на антиген Кратко описание и обяснение За употреба при ин витро диагностика. FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30,Ready-to-Use, (Link) е предназначено за употреба при имунохистохимични изследвания заедно с инструменти Autostainer Link. Антителата на цитокератин 8/18 могат да бъдат полезни за идентифициране на тумори с епителен произход (1).. Клиничната интерпретация на определен вид или неговото отсъствие трябва да бъде придружена от морфологични изследвания с подходящи контроли и трябва да бъде оценена в контекста на анамнезата на пациента и други диагностични изследвания, извършени от квалифициран патолог. Кератин 8/18 (K8/18) (1), CK8/18 (2). Цитокератинът 8/18 (CK8/18) принадлежи към семейството на интермедиерните филаменти, разнообразна група от хетерополимерни протеини, които се състоят от 54 различни гена. Цитокератиновите полипептиди (CK) се класифицират в киселинни (тип I) и неутрални основни (тип II) подсемейства. Полипептидите тип I и II формират двойка и образуват зрелия тетрамерен хетерополимер. CK18 е 45 kda CK, принадлежащо към киселинен тип подсемейство I CK, което обикновено се асоциира с цитокератин CK8 54 kda тип II. Заедно с CK8/18 те изграждат един от цитокератините с ниско молекулно тегло (LMW-CK). CK8/18 се изразява с прост, нестратифициран епител, базални и повърхностни клетки на преходния епител, клетките на лумена/секреторните клетки на сложния епител, мезотелиум, и може да присъства в някои видове мезенхимни клетки (1). Множество членове на семейството на цитокератините могат да бъдат изразени в дадена клетка и са характерни за типа клетка и състоянието на диференциация (1). Почти всички карциноми от епителен произход и мезотелиоми изразяват CK8/18 (2) и затова антителата към CK8/18 са полезни при класифицирането на тумори с неизвестен произход и слабо диференцирани карциноми (1). Антителата към CK8/18 проявяват цитоплазмено и/или мембранно. Фокално слаба експресия също може да а налице в мезенхимните тумори, включително при лейомиомата, рабдомиосаркома, злокачествения меланом, шванома, саркома на Юинг, дезмопластичния малък кръгъл клетъчен тумор, плоскоклетъчния карцином и лимфома (3, 4). Направете справка с General Instructions for Immunohistochemical Staining (Общите указания за имунохистохимично ) на Dako или указанията за системите за откриване, свързани с имунохистохимичните процедури. Осигурен реагент Имуногени Специфичност Смес от две моноклонални антитела от заек, доставени в течно състояние като супернатант от клетъчна култура в 0,05 mol/l Tris-HCl, 0,015 mol/l натриев азид, ph 7,2. Този продукт съдържа стабилизиращ протеин. Clone: EP17/EP30. Изотип: Rabbit IgG. CK8: синтетичен пептид, съответстващ на остатъци в С-крайната част на човешки цитокератин 8 протеин. CK18: човешки цитокератин 18 протеин, изолиран от НТ-29 клетки. CK8/18 е коктейл от две моноклонални антитела. При западния блотинг на клетъчни лизати А431, анти- CK8, клон EP17, разпознава голяма група от 52 kda, съответстваща на очакваното молекулно тегло на CK8; а анти-ck18, клон EP30 разпознава голяма група от 45 kda, съответстваща на очакваното молекулно тегло на CK18. (124416-002) P02832BG_02_IR094/12.2013 стр. 1/5

Предпазни мерки 1. За професионална употреба. 2. Този продукт съдържа натриев азид (NaN 3), химично вещество, което е силно токсично в чист вид. При концентрации на продукта, въпреки че не е класифициран като опасен, натриевият азид може да реагира с оловото и медта във водопроводната система и да се образуват силно експлозивни метални азиди. При изхвърляне в канализацията използвайте обилно количество вода, за да предотвратите натрупване на метален азид във водопроводната система. 3. Като при всеки продукт от биологичен произход тук също трябва да бъдат приложени подходящи работни процедури. 4. Носете подходящи лични предпазни средства, за да избегнете контакт с очите и кожата. 5. Неизползваният разтвор трябва да се изхвърля в съответствие с местните, държавните и федералните разпоредби. Съхранение Да се съхранява при температура 2-8 C. Да не се използва след изтичане срока на годност, указан върху флакона. Ако реагентите се съхраняват при условия, различни от посочените, то тези условия трябва да бъдат проверени от потребителя. Няма видими признаци, които да показват нестабилност на продукта. Следователно, положителните и отрицателните контроли трябва да се анализират едновременно с пробите на пациента. Ако се наблюдава неочаквано, което не може да се обясни с промени в лабораторните процедури и има съмнения за проблем с антитялото, свържете се с отдел "Техническа поддръжка" на Dako. Кратко ръководство Стъпка Коментари Фиксиране Формалин N/A Предварителна обработка EnVision FLEX, High ph (Кодове K8000/ K8004) 20 мин. откриване на епитоп чрез поставяне в нагрят буферен разтвор (HIER), 3-в-1, като се използва PT Link и PT Link Rinse Station Разреждане Готово за употреба 20 мин. инкубация Буфер за Предварително разреден N/A разреждане Отрицателна FLEX Negative Control, Rabbit (Код IR600) 20 мин. инкубация контрола Визуализация EnVision FLEX, High ph (Код K8000) 20 мин. инкубация, 2x5 мин. DAB+ инкубация Контрастен оцветител Тъкан за контроли EnVision FLEX Hematoxylin (Кодове K8008/K8018) Черен дроб в норма 5 мин. инкубация Цитоплазмено/мембранно Слайдове FLEX IHC Microscope Slides (Код K8020) Препоръчват се за по-добро прилепване на тъканните срези към предметните стъкла. Заливка Изисква се безводна, трайна заливка След то срезите трябва да се дехидратират, просветлят и залеят, като се използва трайна среда за заливка. Апаратура Autostainer Link 48 Използвайте специално предназначените за инструментите флакони (код SK200-SK203) *Потребителят трябва винаги да чете информационната листовка в опаковката, за да получи подробни инструкции за процедурата по и работата с продукта. (124416-002) P02832BG_02_IR094/12.2013 стр. 2/5

Приготвяне на препарат Процедура на Интерпретация на то Парафинови срези: Антитялото може да се използва за маркиране на фиксирани във формалин и включени в парафин тъканни срези. От хистологичните препарати трябва да се приготвят срези с дебелина около 4 µm. Предварителна обработка: Изисква се процедура на предварителна обработка на фиксираните във формалин и включени в парафин тъканни срези с използване на метод за откриване на епитоп чрез поставяне на пробата в нагрят буферен разтвор (HIER). Оптимални резултати се получават чрез предварителна обработка на тъканите по метода HIER, като се използва разреден EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (кодове K8000/K8004). Депарафинизацията, рехидратацията и откриването на епитоп могат да се извършат в Dako PT Link (код PT100/PT101). За повече информация, моля, направете справка с "Ръководство на потребителя" за PT Link. Трябва да се използват следните параметри за PT Link: Температура на предварително нагряване: 65 C; температура и време на откриване на епитопа: 97 C за 20 (±1) минути; охлаждане до 65 C. Отстранете стойката за слайдове от PT съда и незабавно потопете слайдовете в буркан/съд (например, PT Link Rinse Station, Код PT109), съдържащ разреден EnVision FLEX Wash Buffer (20x) (Код K8007) със стайна температура. Оставете слайдовете в буфера за промивка Wash Buffer в продължение на 1-5 минути. Тъканните срези не трябва да се оставят да изсъхнат по време на обработката или на последващата процедура на имунохистохимично. За по-добро прилепване на тъканните срези към предметните стъкла се препоръчва използването на FLEX IHC Microscope Slides (Код K8020). След то срезите трябва да се дехидратират, просветлят и залеят, като се използва трайна среда за заливка. Визуализация: Препоръчителната система за визуализация е EnVision FLEX, High ph (код K8000/K8010), като се използва 20-минутна инкубация при стайна температура. Следвайте процедурата, приложена към избраната(ите) система(и) за визуализация. Програма: Времевите интервали на стъпките на и инкубация се програмират предварително в софтуера на Autostainer Link. Препоръчваният обем за прилаган реагент е 1 x 200 µl или 2 x 150 µl за слайд. Моля, направете справка със съответното Ръководство на потребителя за Autostainer Link за подробни указания относно зареждането на слайдове и реагенти. Ако протоколите не са налични в платформата Autostainer Link, моля, свържете се с отдел "Техническо обслужване" на Dako. Инсталационна програма за софтуер на Autostainer Link можете да намерите на www.dako.com\installer. Тази инсталационна програма ще актуализира софтуера за DakoLink с информация за протокола и реагентите за Anti-Human CK8/18, Clone EP17/EP30. Краткото наименование на протокола за антитялото е CK8/18. Всички инкубационни процедури трябва да се извършват на стайна температура. Контрастно : препоръчва се да се използва контрастен оцветител EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (кодове K8008/K8018). За оптимални резултати се препоръчва безводна, трайна среда за заливка. Контроли: Положителните и отрицателните контроли трябва да се извършват едновременно, като се използва същия протокол, който е използван и при взимането на проби от пациента. Положителната контролна тъкан трябва да включва нормален черен дроб, като клетките/структурите трябва да показват видовете реакции, както са описани за тази тъкан в раздел Работни характеристики. Препоръчва се използването на реагент за отрицателни контроли FLEX Negative Control, Rabbit (Link) (код IR600). Моделът клетъчно е цитоплазмено/мембранно. (124416-002) P02832BG_02_IR094/12.2013 стр. 3/5

Работни характеристики Нормални тъкани: Епителните клетки проявяват умерена до силна цитоплазмена и/или мембранна реакция на (5). Трябва да се отбележи, че то на ретикуларни клетки може да се наблюдава в лимфоидни тъкани. Тъканни елементи с положително Надбъбречна жлеза 3/3 Панкреас 3/3 Костен мозък 0/3 Паращитовидна жлеза 3/3 Гърда 3/3 Хипофиза 1/3 Малък мозък 0/3 Простата 3/3 Главен мозък 0/3 Слюнчена жлеза 3/3 Шийка 1/3 Скелетен мускул 0/3 Колон 3/3 Кожа 3/3 Хранопровод 3/3 Тънко черво 3/3 Сърце 0/3 Далак 3/3 Бъбрек 3/3 Стомах 3/3 Черен дроб 3/3 Тестикул 2/3 Бял дроб 3/3 Тимус 3/3 Мезотелиални клетки 2/3 Щитовидна жлеза 3/3 Нерв, периферен 0/3 Сливица 3/3 Яйчник 3/3 Матка 1/3 Тъканни елементи с положително Абнормни тъкани: Епителните клетки проявяват умерена до силна цитоплазмена и/или мембранна реакция на (41/56) (6). Хепатоклетъчен карцином Бъбречноклетъчен карцином Бъбречноклетъчен карцином Белодробен аденокарцином (2) Плоскоклетъчен белодробен карцином (1) Дребноклетъчен белодробен карцином Стомашен адено карцином Аденокарцином на панкреаса Папиларен карцином на щитовидната жлеза Дуктален карцином на гърдата Лобуларен карцином на гърдата Аденокарцином на простатната жлеза Аденокарцином на колона Тъканни елементи с положително 3/3 Меланом 0/3 3/3 Недиференциран карцином 1/3 3/3 Лейомиосарком (1) 0/1 2/2 Рабдомиосарком (1) 0/1 1/1 Чревен карциноид (2) 2/2 3/3 Карцином на яйчниците (2) 2/2 3/3 Фиброзни тъкани (2) 0/2 3/3 Тератогенни тумори - развити (1) 0/1 3/3 Тератогенни тумори - 0/1 неразвити (1) 3/3 Лейомиома (2) 1/2 3/3 Дифузен едроклетъчен В- 0/2 клетъчен лимфом (2) 2/3 Т-клетъчен лимфом (2) 0/2 3/3 Фоликуларен лимфом (2) 0/2 Тъканни елементи с положително (124416-002) P02832BG_02_IR094/12.2013 стр. 4/5

Източници 1. Moll R, Divo M, Langbein L. The human keratins: biology and pathology. Histochem Cell Biol 2008;129:705-33 2. Dabbs DJ. Diagnostic Immunohistochemistry. Philadelphia,PA: Churchill Livingstone, 2002. 3. Adams H, Schmid P, Dirnhofer S, Tzankov A. Cytokeratin expression in hematological neoplasms: A tissue microarray study on 866 lymphoma and leukemia cases. Pathol Res Pract 2008; 204:569-73. 4. Lane EB, Alexander CM. Use of keratin antibodies in tumor diagnosis (review). Semin Cancer Biol 1990; 1:165-79. 5. Yu J. Report of Normal Tissue Immunohistochemical Testing Using Dako Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30. 2013. Report on file, D19056. 6. Yu J. Report of Cancer Tissue Immunohistochemical Testing Using Dako Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30. 2013. Report on file, D19756. Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18 (CK8/18), Clone EP17/EP30 has been created by Epitomics Inc., using Epitomics proprietary rabbit monoclonal antibody technology covered under Patent Nos 5,675,063 and 7,402,409. Каталожен номер Температурни ограничения Медицински апарат за ин витро диагностика Производител Код на партида Съдържанието е достатъчно за <N> теста Годен до Консултирайте се с указанията за употреба Оторизиран представител в Европейската общност Издание 04/14 (124416-002) P02832BG_02_IR094/12.2013 стр. 5/5